(Cytométrie en flux, FCM) est un analyseur de cellules qui mesure l'intensité de fluorescence des marqueurs cellulaires colorés. Il s'agit d'une technologie de haute technologie développée sur la base de l'analyse et du tri des cellules uniques. Il peut rapidement mesurer et classer la taille, la structure interne, l'ADN, l'ARN, les protéines, les antigènes et autres propriétés physiques ou chimiques des cellules, et peut être basée sur la collecte de ces classifications.
Le cytomètre en flux se compose principalement des cinq parties suivantes:
1 Chambre d'écoulement et système de fluidiques
2 Système de mise en forme de lumière laser et de faisceau
3 système optique
4 Système électronique, stockage, affichage et analyse
Système de tri à 5 cellules
Parmi eux, l'excitation laser dans la source de lumière laser et le système de formation de faisceau est la principale mesure des signaux de fluorescence dans la cytométrie en flux. L'intensité de la lumière d'excitation et le temps d'exposition sont liées à l'intensité du signal de fluorescence. Le laser est une source de lumière cohérente qui peut fournir un éclairage à longueur d'onde, à haute intensité et à haute stabilité. C'est la source de lumière d'excitation idéale pour répondre à ces exigences.
Il existe deux lentilles cylindriques entre la source laser et la chambre d'écoulement. Ces objectifs concentrent un faisceau laser avec une section transversale circulaire émise par la source laser dans un faisceau elliptique avec une coupe transversale plus petite (22 μm × 66 μm). L'énergie laser dans ce faisceau elliptique est distribuée en fonction d'une distribution normale, garantissant une intensité d'éclairage cohérente pour les cellules passant par la zone de détection du laser. D'un autre côté, le système optique se compose de plusieurs ensembles de lentilles, de trous d'épingle et de filtres, qui peuvent être à peu près divisés en deux groupes: en amont et en aval de la chambre d'écoulement.
Le système optique devant la chambre d'écoulement se compose d'une lentille et d'un sténopé. La fonction principale de la lentille et du trou de pin (généralement deux lentilles et un sténopé) est de concentrer le faisceau laser avec une section transversale circulaire émise par la source laser dans un faisceau elliptique avec une coupe transversale plus petite. Cela distribue l'énergie laser en fonction d'une distribution normale, garantissant une intensité d'éclairage cohérente pour les cellules à travers la zone de détection du laser et minimisant les interférences de la lumière parasite.
Il existe trois principaux types de filtres:
1: Filtre de passe long (LPF) - permet uniquement de la lumière avec des longueurs d'onde supérieures à une valeur spécifique à traverser.
2: Filtre passe-court (SPF) - permet uniquement la lumière avec des longueurs d'onde sous une valeur spécifique à traverser.
3: Filtre passe-bande (BPF) - permet uniquement par la lumière dans une plage de longueur d'onde spécifique pour passer.
Différentes combinaisons de filtres peuvent diriger des signaux de fluorescence à différentes longueurs d'onde aux tubes photomultiplils individuels (PMT). Par exemple, les filtres pour détecter la fluorescence verte (FITC) devant PMT sont LPF550 et BPF525. Les filtres utilisés pour détecter la fluorescence rouge orange (PE) devant le PMT sont LPF600 et BPF575. Les filtres pour détecter la fluorescence rouge (Cy5) devant le PMT sont LPF650 et BPF675.
La cytométrie en flux est principalement utilisée pour le tri des cellules. Avec l'avancement de la technologie informatique, le développement de l'immunologie et l'invention de la technologie des anticorps monoclonaux, ses applications en biologie, médecine, pharmacie et autres domaines deviennent de plus en plus répandues. Ces applications incluent l'analyse de la dynamique cellulaire, l'apoptose cellulaire, le typage cellulaire, le diagnostic tumoral, l'analyse de l'efficacité du médicament, etc.
Heure du poste: sept-21-2023
