(Flow cytometry, FCM) est un analyseur cellulaire qui mesure l'intensité de fluorescence des marqueurs cellulaires colorés. Il s’agit d’une technologie de haute technologie développée sur la base de l’analyse et du tri de cellules uniques. Il peut rapidement mesurer et classer la taille, la structure interne, l'ADN, l'ARN, les protéines, les antigènes et d'autres propriétés physiques ou chimiques des cellules, et peut se baser sur la collecte de ces classifications.
Le cytomètre en flux se compose principalement des cinq parties suivantes :
1 Chambre à circulation et système fluidique
2 Source de lumière laser et système de mise en forme du faisceau
3 Système optique
4 Système électronique, de stockage, d'affichage et d'analyse
5 Système de tri cellulaire
Parmi eux, l’excitation laser dans la source de lumière laser et le système de formation de faisceaux constitue la principale mesure des signaux de fluorescence en cytométrie en flux. L'intensité de la lumière d'excitation et le temps d'exposition sont liés à l'intensité du signal de fluorescence. Le laser est une source de lumière cohérente qui peut fournir un éclairage à longueur d'onde unique, de haute intensité et de haute stabilité. C'est la source lumineuse d'excitation idéale pour répondre à ces exigences.
Il y a deux lentilles cylindriques entre la source laser et la chambre de circulation. Ces lentilles focalisent un faisceau laser de section circulaire émis par la source laser en un faisceau elliptique de section plus petite (22 μm × 66 μm). L'énergie laser au sein de ce faisceau elliptique est distribuée selon une distribution normale, garantissant une intensité d'éclairage constante pour les cellules traversant la zone de détection laser. D'autre part, le système optique se compose de plusieurs ensembles de lentilles, de trous d'épingle et de filtres, qui peuvent être grossièrement divisés en deux groupes : en amont et en aval de la chambre de circulation.
Le système optique devant la chambre de circulation se compose d'une lentille et d'un sténopé. La fonction principale de la lentille et du sténopé (généralement deux lentilles et un sténopé) est de focaliser le faisceau laser de section circulaire émis par la source laser en un faisceau elliptique de section plus petite. Cela distribue l'énergie laser selon une distribution normale, garantissant une intensité d'éclairage constante pour les cellules dans la zone de détection laser et minimisant les interférences de la lumière parasite.
Il existe trois principaux types de filtres :
1 : Filtre passe-long (LPF) - permet uniquement de passer à travers la lumière dont les longueurs d'onde sont supérieures à une valeur spécifique.
2 : Filtre passe-court (SPF) - permet uniquement de passer à travers la lumière dont les longueurs d'onde sont inférieures à une valeur spécifique.
3 : Filtre passe-bande (BPF) - permet uniquement de laisser passer la lumière dans une plage de longueurs d'onde spécifique.
Différentes combinaisons de filtres peuvent diriger les signaux de fluorescence à différentes longueurs d'onde vers des tubes photomultiplicateurs (PMT) individuels. Par exemple, les filtres pour détecter la fluorescence verte (FITC) devant le PMT sont le LPF550 et le BPF525. Les filtres utilisés pour détecter la fluorescence orange-rouge (PE) devant le PMT sont le LPF600 et le BPF575. Les filtres de détection de la fluorescence rouge (CY5) devant le PMT sont le LPF650 et le BPF675.
La cytométrie en flux est principalement utilisée pour le tri cellulaire. Avec les progrès de la technologie informatique, le développement de l’immunologie et l’invention de la technologie des anticorps monoclonaux, ses applications en biologie, médecine, pharmacie et dans d’autres domaines deviennent de plus en plus répandues. Ces applications incluent l'analyse de la dynamique cellulaire, l'apoptose cellulaire, le typage cellulaire, le diagnostic des tumeurs, l'analyse de l'efficacité des médicaments, etc.
Heure de publication : 21 septembre 2023
